細菌內毒素定量檢測之光度測定法試驗應在特定的儀器中進行，溫度一般為37℃±1℃。為保證濁度和顯色試驗的有效性，應預先進行標準曲線的可靠性試驗以及供試品溶液的干擾試驗。當試驗環(huán)境中發(fā)生了任何可能影響檢測結果的改變時，試驗的有效性應重新檢測。

　　
 

　　1、標準曲線的制備

　　

　　用標準內毒素配成溶液并制成至少3個濃度的稀釋液(稀釋度不得大于10)，低濃度不得低于所用鱟試劑的標示檢測限。每一稀釋步驟的混勻時間同凝膠法，每一濃度至少做3支平行管。同時要求做2支陰性對照。當陰性對照在設定的時間內不發(fā)生反應，將全部數(shù)據(jù)進行線性回歸分析。根據(jù)線性回歸分析，標準曲線的相關系數(shù)(r)的絕對值應該大于或等于0.980.試驗方有效。否則須重新試驗。

　　

　　2、細菌內毒素定量檢測之光度測定法：

　　

　　按“光度法的干擾試驗”中的操作步驟進行檢測。使用溶液C生成的標準曲線來計算溶液A的每一平行管的內毒素濃度。選擇標準線中點或一個靠近中點的內毒素濃度。制備溶液A、B、C和D。供試品和鱟試劑的加樣量、供試品和鱟試劑的比例以及保溫時間等，參照所用儀器和試劑的有關說明進行。每種溶液至少做2個平行管。

　　

　　細菌內毒素定量檢測試驗須符合以下三個條件方為有效：

　　

　?。?）系列溶液C的結果要符合“光度技術預試驗”下“標準曲線的可靠性試驗”中的要求。

　　

　　（2）用溶液B中的內毒素濃度減去溶液A中的內毒素濃度后，計算出的內毒素的回收率要在50%-200%的范圍內。

　　

　?。?）溶液D(陰性對照)在規(guī)定的反應時間內未檢測出內毒素。

　　

　　若供試品溶液所在平行管的平均內毒素濃度乘以稀釋倍數(shù)和濃度后，小于規(guī)定的內毒素限值，判供試品符合規(guī)定。若大于規(guī)定的內毒素限值，判供試品不符合規(guī)定。